Facultad Politécnica - Universidad Nacional de Asunción

Pública

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PINV15-573

El principal interés del proyecto es comprender cómo se coordinan la estructura del ADN y la función de las topoisomersas durante la replicación. Para ello, utilizaremos la electroforesis bidimensional en geles de agarosa y la genética clásica en combinación con la simulación computacional para analizar el superenrollamiento, encadenamiento y anudamiento de moléculas de ADN durante la replicación y la dinámica de las moléculas parcialmente parcialmente replicadas en presencia o ausencia de las topoisomerasas.

1. CONSTRUCCIÓN DE VECTORES Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS DE ADN: a) Preparación de muestras ADN enriquecidas en moléculas de las siguientes familias: superenrollados (ScDimers), encadenados (CatAs) y anudados (KnDimers). b) Preparación de muestras ADN enriquecidas en moléculas de ADN parcialmente replicadas (Intermediarios de Replicación, RIs).
2. ÁNALISIS MEDIANTE ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL: Las muestras se someterán a electroforesis bidimensional, a diferentes concentraciones de agarosa y potencial electrostático, en presencia o ausencia de las topoisomersas. Mediante inmunodetecciones se analizarán los cambios en la movilidad electroforética de las moléculas como función de los parámetros anteriormente mencionados.
3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LOS DATOS: Las movilidades electroforéticas de las distintas familias serán analizadas mediante curvas de regresión; con estos resultados y los obtenidos por análisis de las inmunodetecciones se procederá a comparar las movilidades entre las diferentes familias y entre los topoisómeros de una misma familia.
4. SIMULACIÓN COMPUTACIONAL: a) En base a los datos recolectados de las inmunotecciones, se determinará la difusividad de cada topoisómero, este parámetro será utilizado en la simulación computacional de la ecuación de conservación y transporte de masa (Maxwell-Stefan). b) Se verificará el grado de concordancia entre los resultados experimentales y los de la simulación numérica.
5. PUBLICACIÓN FINAL Y DIVULGACIÓN: Considerando la originalidad del proyecto, pretendemos publicar los resultados en revistas internacionales. Además, se realizará un seminario gratuito sobre movilidad electroforética dirigido al público en general, especialmente a alumnos de carreras afines a la investigación.

Finalizado

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